Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型式糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来肾脏自身特异性到显现出来1DF癌症临床研究工作症状的实质性率在学童一时期就有很好的描绘出，多个肾脏自身特异性无症状的学童里有70%在血清转成后10年末患上癌症，而随访15年的学童这一%-减小到84%。相较之下，占临床研究工作1DF癌症一半以上的DF1DF癌症的病症系统还不会获取更好的研究工作。

越来越多的人开始用于分期系统来假设1DF癌症的实质性：群微在显现出来多种肾脏自身特异性时进入第1阶段，显现出来摄入量极其时进入第2阶段，显现出来症状时进入第3阶段。一些多发肾脏自身特异性无症状的群微，在1期和2期，实质性较很慢，并发展为病症的1DF癌症。我们以后描绘出了一个大在首次验证到多种肾脏自身特异性比对后至少10年无癌症的极很慢实质性者，这第一组病患人数少，但特征更加明确。随后，我们辨认出肾脏自身特异性特异性CD8+T肝细胞底物在实质性较很慢的病患里基本不存在，但在近期病症和长期存在的癌症病患里很容易验证到。这意味著表明，与实质性病患相较，这些病患化脓性底物的调节强化。

早期研究工作表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量短时间，但癌症病患存在一些功能缺陷，其里之外对IL-2的底物能够减少。此外，癌症病患里的effectCD4+T肝细胞意味著对调节更具抵抗性，表现为effectT肝细胞的抑制作用减弱，自然造成的Treg和微外造成的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T肝细胞里IL-2底物减弱。本研究工作的目的是描绘出了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极较很慢实质性者里的特征，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群结合的纵向研究工作，在21岁以下患病的病患亲属里验证1DF癌症的危险各种因素。我们以后描绘出了长期较很慢实质性者的特征，他们保持多重肾脏自身特异性无症状将近10年，但不会显现出来癌症的临床研究工作症状，很慢性或非开展性化脓性。随后，10名再次保持无癌症并愿意提供大量血液比对的较很慢实质性者扩展到T和B肝细胞功能深入研究。在目前的研究工作里，8名很慢实质性者(SP第一组)，里位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身特异性无症状。所有的参与者都受制于1DF癌症实质性的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身特异性对某些特异性的无症状底物，然而，一名病患仍未受制于2期至少6年，但不会显现出来临床研究工作症状，一名病患被病症为癌症，该受试者72岁，在捕获实验比对时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究里对该丝氨酸开展了单独审计。转化外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多常量流式肝细胞绝技和T肝细胞抑制作用试验审计丝氨酸里Treg的频谱、表DF和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和回归)开展无监督聚类深入研究，审计Treg表DF。

结果：与肥胖丝氨酸相较，来自很慢实质性微的思绪CD4+T肝细胞的监督聚类结果显示，激活的思绪CD4+ Treg频谱减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来减小有关。一名HbA1c急剧下降的病患与实质性较很慢者和转换的小鼠相较，Treg谱有所各有不同。功能深入研究表明，与肥胖丝氨酸相较，来自较很慢实质性微的Treg介导的CD4+effectT肝细胞抑制作用明显损毁。表现为对effectCD4+T肝细胞CD25和CD134表达出来的抑制作用减小。

平面图1 深入的表DF深入研究结果显示，CD4+Treg亚DF在很慢实质性配置文件里减小。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标明物表达出来鉴定出10个元簇:思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个各有不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个节点都有一个集群(100个集群)，更多的元集群(10个元集群)在节点第一组一处上色。每个节点里的饼平面图坚称单个标明的表达出来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示结构上标明表达出来。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)作用于平面图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)非常原子量为每个metacluster装该线平面图(原子量> 0.05%)考虑到为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T肝细胞(l)。绿色橘色都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选下标秩检查和。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模DF证实，Treg频谱的减小是实质性较很慢的标志。分级介导(a - f)和柑橘深入研究(g-k)非常SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的都有性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来开展转化，模拟FlowSOM群微。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)第一组以及丝氨酸SP 606(绿色)里CD25+ cd127的频谱摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的装该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来风力着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD配置文件相互间的各有不同。(j)装该线平面图结果显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)第一组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的非常原子量(%-)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表DF(粉红色)和Treg标明非常表达出来与文化背景表达出来(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。文化背景与所有其他簇里标明的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选下标秩检查和

平面图3 与肥胖献血者相较，实质性较很慢者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T肝细胞元簇(思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达出来标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表达出来热平面图(sp606不之外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表达出来串联，结果显示直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon筛选下标秩和检查和，p< 0.07(绿色)所有丝氨酸之外，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和转换的HD不之外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表达出来，从分级介导，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)串联，结果显示直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选下标秩检查和

平面图4 来自较很慢实质性的CD4+ treg肝细胞控制effectCD4+T肝细胞的能够减少。SP第一组用黄色的该线和橘色坚称，HD第一组用黑色的该线和橘色坚称，绿色的该线/橘色坚称丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被标明为CFSE, Treg按注意到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠增殖肝细胞，培育3天后开展流式肝细胞绝技验证。(a-d)与CD4+接收者者非常应的treg培育(诱导)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。用于无症状对照(激活的响应肝细胞另有treg)计算抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

平面图5 effectCD4+T肝细胞对较很慢实质性的T肝细胞增殖的抑制作用更敏感。SP第一组用黄色的该线和橘色坚称，HD第一组用黑色的该线和橘色坚称，绿色的该线/橘色坚称丝氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标明，treg按注意到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠增殖肝细胞，培育3天后开展流式肝细胞绝技(CD25反染)和肝细胞因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

论断：我们结论的论断是，来自较很慢实质性子的增殖思绪CD4+Treg在GITR表达出来里获取了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1DF癌症风险群微里的异质性的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28